Reprogramação da diferenciação por miRNAs dependentes de CDX2

Data
2017-08-29
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Resumo
No trato gastrointestinal, SOX2 e CDX2 são os fatores de transcrição chave para a diferenciação dos tecidos, particularmente esófago, estômago e intestino. Na parte anterior o SOX2 tem um papel ativo na regulação da diferenciação da mucosa esofágica e gástrica, enquanto na parte posterior é o CDX2 que desempenha um papel essencial na diferenciação intestinal. Sabe-se que a expressão de SOX2 e CDX2 é mutuamente exclusiva, em tecidos normais. Para além disso, experiências em modelos animais mostraram que quando se diminui a expressão de SOX2 ocorre um aumento de CDX2 e vice-versa. As células com perda total de expressão do gene CDX2 têm um aumento da expressão do gene SOX2, demonstrando uma interligação na expressão destas proteínas. Uma vez que não é conhecida atividade repressora de CDX2 tentou-se estudar uma regulação negativa mediada por microRNAs, Recorrendo a um array de 754 microRNAs foram selecionados 106 que obtiveram um Ct<32 tendo sido normalizados para os 3 housekeepings, e para a média de todos os microRNAs. Para obter uma lista mais restrita e possivelmente mais robusta de microRNAs diferencialmente expressos nas 3 linhas celulares em estudo, selecionamos os miRNAs que apareceram diferencialmente expressos quando a normalização foi feita utilizando a média e pelo menos um dos 3 housekeepings. Obtivemos uma lista de 10 potenciais microRNAs de interesse regulados por CDX2. Com recurso à base de dados miRanda e pesquisa bibliográfica fomos investigar quais desses miRNAs poderiam regular o mRNA SOX2. Selecionamos os let-7d, miR-27b e miR-19a para validação. O miR-19a e miR-let7d não foram validados, em contrapartida o miR-27b demonstrou um aumento significativo da sua expressão na linha que expressa CDX2 o que pode significar a sua regulação por CDX2. Futuramente este microRNA será estudado quanto ao seu efeito no mRNA de SOX2.
In the gastrointestinal tract, SOX2 and CDX2 are key transcription factors for tissues differentiation, particularly esophagus, stomach and intestine. SOX2 has an active role in the regulation of differentiation of esophageal and gastric mucosa, while CDX2 has an essential role in the intestinal differentiation. It is known that expression of SOX2 and CDX2 is mutually exclusive in normal tissues. Furthermore, experiments in animal have shown that when SOX2 expression decreases, CDX2 increased and vice versa. Cells with total loss of CDX2 gene expression have an increased expression of SOX2 gene, showing an interconnection in the expression of these proteins. Since it is not known any repressor activity of CDX2 it was put to the test a down regulation mediated by microRNAs. Using an array of 754 microRNAs were selected 106, which obtained a Ct <32 being normalized for 3 housekeeping’s, and for global averages. To obtain a more restricted list and possibly more robust of microRNAs differentially expressed in 3 cell lines under study, we selected miRNAs that appeared differentially expressed when the normalization was done, using the average and at least one of 3 housekeeping’s. We obtained a list with 10 potential microRNA of interest regulated by s CDX2. Using miRanda database and literature we were investigating which of these miRNAs could regulate SOX2 mRNA. We selected the let-7d, miR-27b and miR-19a for validation. The miR-19a and miR-let7d were nor validated, however miR-27b showed a significant increase in its expression in line that express the CDX2 which can mean their regulation by CDX2. In the future this microRNA will be studied for regulation in the SOX2 mRNA.
Descrição
Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde
Palavras-chave
Neoplasias , Cólon , MicroRNAs , Reprogramação
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