Citogenética Convencional e FISH - Apoio no diagnóstico Hematooncológico

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Resumo
A citogenética é o estudo da estrutura, função, número e comportamento biológico e patológico dos cromossomas. Pode ser dividida em citogenética clássica (ou convencional), que se baseia na análise dos cromossomas de células em divisão e citogenética molecular, que engloba técnicas essencialmente com base em hibridação in situ, independentes da obtenção de células em divisão. O principal objetivo da citogenética clínica é o diagnóstico das anomalias cromossómicas, que têm sido uma ferramenta indispensável no entendimento da patologia da leucemia, incluindo algumas alterações genéticas envolvidas na patogénese e previsão da resposta ao tratamento. A leucemia trata-se de uma doença neoplásica que afeta a normal produção e desenvolvimento e diferenciação das células sanguíneas. Existem quatro tipos fundamentais de leucemias: leucemia linfoblástica crónica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielóide crónica e leucemia mielóide aguda. A abordagem laboratorial que se aplicou neste relatório de estágio está muito dependente do tipo de leucemia, de uma forma generalizada na leucemia mielóide crónica e a leucemia mielóide aguda realizou-se culturas diretas e na leucemia linfoblástica crónica e na leucemia linfoblástica aguda executou-se culturas com estimuladores. Durante este estágio curricular no Laboratório de Genética do Centro Hospitalar de Trásos-Montes e Alto Douro, realizaram-se 50 culturas em amostras anonimizadas com suspeita de leucemia, 36 culturas diretas e sincronizadas e 14 culturas com estimuladores assim como as subsequentes manipulações e bandeamento. O bandeamento G aplicou-se em todas as culturas e o bandeamento NOR e bandeamento C empregou-se quando surgiram dúvidas no bandeamento G. Também se realizou a técnica de hibridização in situ por fluorescência (FISH) provenientes das suspensões celulares. Usaram-se sondas de sequência única sequência única #5, #7, #20, #13, #17,#11, α-sat #8, #12 e dual fusion t(9;22),t(4;14), t(11;14), t(14;18) e t(15;17) em 52 amostras. Seguidamente, procedeu-se a análise e elaboração dos cinco cariótipos para cada amostra, em que se usou para captação e edição das metafases o software Cytovision e Leica-CW4000 e a descrição dos respetivos cariótipos utilizando-se a nomenclatura descrita pelo Internacional System for human Cytogenetic Nomenclature 2016 (ISCN). Nas 36 culturas diretas e sincronizadas obtiveram-se: 22 amostras com cariótipo sem alterações cromossómicas, 2 amostras que apresentavam alterações cromossómica e 10 amostras sem crescimento celular. Nas 15 culturas com estimuladores observaram-se: 2 amostra com cariótipos sem alterações cromossómicas, 1 amostra com alterações cromossómicas, 11 amostras sem crescimento celular A integração na rotina de trabalho no laboratório de citogenética, permitiu-me compreender um pouco melhor a importância desta área e as anomalias cromossómicas associadas a cada tipo de leucemia. Este estágio também possibilitou-me adquirir autonomia, responsabilidade e rigor essenciais para quem trabalha num laboratório.
Cytogenetics is the study of the structure, function, number and biological and pathological behavior of chromosomes. It can be divided into classic (or conventional) cytogenetics, which is based on the analysis of the chromosomes of cells in division and molecular cytogenetics, which includes techniques essentially based on in situ hybridization, independent of obtaining cells in division. The main objective of clinical cytogenetics is the diagnosis of chromosomal abnormalities, which have been an indispensable tool in understanding the pathology of leukemia, including some genetic changes involved in the pathogenesis and predicting the response to treatment. Leukemia is a neoplastic disease that affects the normal production and development and differentiation of blood cells. There are four fundamental types of leukemia: chronic lymphoblastic leukemia, acute lymphoblastic leukemia, chronic myeloid leukemia and acute myeloid leukemia. The laboratory approach that was applied in this internship report is very dependent on the type of leukemia, in a generalized way in chronic myeloid leukemia and acute myeloid leukemia was performed in direct cultures and in chronic lymphoblastic leukemia and in acute lymphoblastic leukemia cultures were performed with stimulators. During this curricular internship at the Genetics Laboratory of the Centro Hospitalar de Trás-os-Montes and Alto Douro, 50 cultures were performed on anonymized samples with suspected leukemia, 36 direct and synchronized cultures and 14 cultures with stimulators as well as the subsequent manipulations and banding. G banding was applied to all cultures and NOR and C banding was used when doubts in G banding arose. The fluorescence in situ hybridization (FISH) technique from cell suspensions was also performed. Single sequence probes # 5, # 7, # 20, # 13, # 17, # 11, α-sat # 8, # 12 and dual fusion t(9;22), t(4;14), t(11 14), t(14;18) and t(15;17) in 52 samples. Then, the five karyotypes were analyzed and elaborated for each sample, in which the Cytovision and Leica-CW4000 software was used to capture and edit the metaphases and the description of the respective karyotypes using the nomenclature described by the International System for human Cytogenetic Nomenclature 2016 (ISCN). In the 36 direct and synchronized cultures, 22 samples with karyotype without chromosomal alterations, 2 samples with chromosomal alterations and 10 samples without cell growth were obtained. In the 15 cultures with stimulators, we observed: 2 samples with karyotypes without chromosomal alterations, 1 sample with chromosomal alterations, 11 samples without cell growth The integration in the work routine in the cytogenetics laboratory, allowed me to understand a little better the importance of this area and the chromosomal abnormalities associated with each type of leukemia. This internship also made it possible for me to acquire autonomy, responsibility and rigor essential for those who work in a laboratory.
Descrição
Relatório de Estágio original, para o efeito da obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia para as Ciências da Saúde, na Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro
Palavras-chave
Citogenética Convencional , Citogenética Molecular
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