Teses de Doutoramento da UTAD http://hdl.handle.net/10348/2 2020-02-17T14:43:07Z 2020-02-17T14:43:07Z Doktorovová, Slavomíra http://hdl.handle.net/10348/3423 2014-12-13T02:01:00Z 2013-01-01T00:00:00Z

Título: Development, physico-chemical and toxicological characterisation of solid lipid nanoparticles for application in breast cancer therapy Autor: Doktorovová, Slavomíra Resumo: As nanopartículas de lípidos sólidos (SLN, do inglês “solid lipid nanoparticles”) são transportadores coloidais de fármacos, constituídos por uma matriz de lípidos sólidos à temperatura corporal e à temperatura ambiente, estabilizados por agentes tensioactivos apropriados. No âmbito da presente tese, estes sistemas foram desenvolvidos com objectivo de administração de fármacos pouco solúveis em água, e para facilitar a administração direccionada a células de cancro. O objectivo deste trabalho consistiu em explorar o potencial das SLN no tratamento da invasão celular de cancro de mama, nomeadamente das células HER2/neu positivas. Foram desenvolvida partículas cuja composição consistiu no Imwitor 900K ou Compritol 888 ATO (como lípidos sólidos), no cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) como lípido catiónico/tensioactivo e no Lutrol F68 ou Miranol C32 Ultra como agente tensioactivo. Como método de produção, foi utilizada a homogenização a alta pressão ou a alta velocidade, seguindo-se a optimização das respectivas formulações, as quais foram utilizadas para os estudos posteriores. As SLN foram caracterizadas em termos de distribuição de tamanho médio das partículas, cristalinidade de matriz lipídica sólida e estabilidade durante armazenamento. Foram obtidas SLN com tamanho médio das partículas entre 115 nm e 334 nm e d0.90 inferior a 1 μm. O estado sólido das mesmas foi confirmado por calorimetria diferencial de varrimento e por difracção de raios X. Todas as formulações apresentaram estabilidade adequada ao longo de 5 semanas, quer à temperatura ambiente, quer a 4 °C. Apesar da liofilização com o crioprotector trealose, a estabilidade das SLN não liofilizadas revelou-se bastante superior. A formulação designada como cSLN-C manteve-se estável durante um período mínimo de 12 semanas. As SLN são, em geral, consideradas como transportadores coloidais com baixa toxicidade. Mesmo assim, o efeito das SLN per si tem importância na interpretação da interacção de formulações que contém um fármaco ou um anticorpo com as células. As SLN desenvolvidas neste trabalho não apresentaram toxicidade na concentração de 0,01 mg/ml. Utilizando a concentração de 0,1 mg/ml a viabilidade celular diminuiu dependendo da linha celular utilizada e tempo de exposição. A dose 1,0 mg/ml foi tóxica nas linhas celulares seleccionadas para este trabalho. Dentro destas, MCF-7 (carcinoma de mama, receptor de estrogénio positivo, HER2-neu negativo) foram as mais susceptíveis aos danos causados pelas SLN, as BT-474 (carcinoma mamário, HER2-neu positivo), HepG2 (hepatocarcinoma) e Caco-2 (cólon adenocarcinoma) foram menos susceptíveis em ordem decrescente. A toxicidade das SLN foi causada por disrupção de integridade das membranas celulares. Danos em ácido deoxiribonucléico (ADN) foram detectados por ensaio cometa. Foram reportados poucos danos – quando comparado com controlo sem tratamento (não significativo nas concentrações não tóxicas). Também foram detectados danos em purinas, que não causaram quebras de ADN. Alguns sinais de stress oxidativo foram detectados em células HepG2: a fluorescência de diacetato de diclorofluoresceina (DCFDA) encontrou-se aumentada relativamente aos controlos sem tratamento e aos positivos, verificou-se um aumento da actividade da enzima superóxido dismutase e uma diminuição da actividade de glutationa reductase. Apesar destes sinais de existência de stress oxidativo, os lípidos membranares não foram afectados (determinação como substâncias reactivas ao ácido tiobarbitúrico, TBARS). Estes resultados estão em concordância com poucos danos detectados em ADN (relativamente ao controlo sem tratamento). Os danos causados por stress oxidativo podem ocorrer em células com capacidade antioxidante inferior à das células HepG2. A capacidade de indução de stress oxidativo pode, hipoteticamente, ser vantajosa em veiculação de fármacos quimioterapêuticos, cujo mecanismo de acção exige existência de radicais livres, e pode, parcialmente, contribuir para a melhoria de eficácia destes medicamentos, quando veiculadas em SLN in vitro e in vivo. A Curcumina foi seleccionada como fármaco-modelo com potencial actividade antineoplásica. A baixa solubilidade aquosa, instabilidade em pH alcalino e fotossensibilidade são propriedades que fazem da curcumina um fármaco ideal para a encapsulação em SLN. Contudo, a solubilidade em vários lípidos foi igual ou inferior a 1 %. A baixa solubilidade em lípidos influenciou a capacidade de carga. Em combinação com as limitações atribuídas à toxicidade das SLN, apenas pode ser administrada 10 μg/ml (27 μM) no máximo, uma dose que é insuficiente para observar os efeitos anticancerígenos da curcumina. Um anticorpo anti- HER2/neu foi colocado na superfície das SLN utilizando a interacção streptavidina-biotina. O efeito de complexo anticorpo-SLN foi governado pela toxicidade das próprias SLN. A conjugação com o anticorpo melhorou significativamente a internalização de complexos nas células de cancro mamário. O efeito foi mais marcado em células BT474, HER2/neu positivas. O tratamento com complexo SLN-anticorpo causou uma diminuição de viabilidade celular das linhas de cancro de mama superior ao efeito das partículas isoladas ou do anticorpo isolado.; Solid lipid nanoparticles (SLN) are colloidal carriers consisting of lipid cores that are solid at body and room temperature dispersed in aqueous phase and stabilized by suitable surfactant. They were developed to improve drug delivery of drugs that are poorly soluble in water and to enable targeted delivery to cancer cells. The aim of this work was to explore the potential of SLN in treatment of breast cancer cell invasion, namely HER2/neu positive breast cancer cells. A series of SLN composed of Imwitor 900K or Compritol 888 ATO as solid lipid, cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) as cationic lipid/surfactant and Lutrol F68 or Miranol C32 Ultra as surfactants was developed. Optimized high shear homogenisation of high pressure homogenisation were used as preparation methods. SLN were characterized in terms of particle size distibution, lipid core crystalinity and storage stability. SLN with mean particle size between 115 nm and 334 nm and d0.50 below 0.5 μm were obtained; the crystalline state of lipid cores was confirmed by differential scanning calorimetry and X-ray diffraction. All SLN were stable for at least 4 weeks at room temperature and 4 °C, which was superior to stability of the same SLN freezedryed with trehalose. Compritol-composed SLN were stable over 12 weeks. SLN are in general considered as safe colloidal carriers, their effect on living cells however cannot be neglected when interpreting the studies of interaction of drug-loaded and/or targeted SLN with cells. SLN developed in this work were non-toxic to living cells at a dose 0.01 mg/ml; cell viability was reduced to various extent at 0.1 mg/ml depending on cell line and time of exposure and at 1.0 mg/ml the SLN were toxic to the selected cell lines. Among the used cell lines, MCF-7 cells (breast carcinoma, estrogen receptor positive, Her2/neu negative) were the most susceptible to our SLN, followed by BT-474 (breast carcinoma, HER2/neu positive), HepG2 (hepatocarcinoma) and Caco-2 (colorectal carcinoma) cells. Toxicity of SLN was caused mostly by disruption of membrane integrity. DNA damage was examined by comet assay and was detected in a limited extent, compared to untreated controls (not significant at non-toxic concentrations). Damage to purine bases that did not directly lead to DNA strand breaks was also detected. Some signs of oxidative stress was detected in HepG2 cells: dichlorofluorescein-diacetate (DCFDA) assay revealed increase in free radicals content compared to untreated and positive controls, activity of superoxid dismutase was found increased and activity of glutathion reductase was drastically decreased. Despite these signs of oxidative stress, membrane lipids were not affected – as determined by thiobarbituric acid reactive species (TBARS) determination. This finding is in line with only slightly increased DNA strand breaks (compared to untreated control). Damage caused by oxidative stress after SLN exposure may however occur in cells with lower antioxidant capacity than HepG2 cells. The capacity to induce oxidative stress can hypotethically be beneficial for delivery of chemotherapeutic drugs – that require some free radical increase for their action – and may partly explain many reports on SLN improving efficiency of chemotherapeutics in vitro and in vivo. Curcumin was selected as model drug with potential chemotherapeutic effect. Its low solubility, instability at alkaline pH and light make it an ideal candidate for encapsulation into SLN. Unfortunately, its solubility in solid lipids was limited to 1% (w/w) and to lipid mixtures containing either monoacylglycerides or polyethylenglycol. This affected the resulting drug loading, which together with limitations by SLN toxicity only enabled use of dose equal or lower than 10 μg/ml (27μM) of curcumin – i.e. doses lower than those at which anticancer effects were observed. An antiHER2/neu antibody was attached to SLN surface via streptavidin-biotin binding. The effect of targeted complex was influenced mostly by the toxicity of SLN alone, but at non-toxic dose of SLN a synergistic effect between SLN and the antibody was observed. The antibody improved significantly cell internalization into breast cancer cells, mostly in HER2/neu positive BT-474 cells but to some extent also in MCF-7 cells. Exposure to targeted SLN leads to cell viabilities lower than when exposed to antibody alone or SLN alone. Descrição: Tese de Doutoramento em Genética Molecular Comparativa

2013-01-01T00:00:00Z Leite, Eduardo Manuel de Almeida http://hdl.handle.net/10348/3397 2014-12-12T02:01:00Z 2014-12-11T00:00:00Z

Título: An academic contribution toward qualitative evaluations of surprise business takeover attack: an historical perspective Autor: Leite, Eduardo Manuel de Almeida Resumo: Este estudo estabelece uma comparação entre as guerras negociais, as quais chamamos de concorrência, e as batalhas políticas, as quais denominamos de guerra. Baseámos essa comparação na obra Surprise Attack de Kam. Kam estabelece a hipótese de que no mundo político, existe sempre a possibilidade de acontecerem ataques de surpresa e que esses ataques não são previsíveis. Contrariamente a kam, o estudo atual apresenta a possibilidade de que a maioria dos ataques nos negócios pode ser previsível. A razão para isso não acontecer, prende-se com a pobre natureza preditiva dos modelos estocásticos, pelo facto de captarem apenas o lado quantitativo de análise. Ou seja, muitas vezes nós analisamos os negócios apenas a partir de uma posição matemática e quantitativa, em vez de uma perspetiva holística. O estudo atual procura preencher esta lacuna, através da junção de um método qualitativo teórico sistematizado e que permite uma avaliação mais extensiva dos negócios, permitindo avaliar a exposição das empresas aos ataques de surpresa e aquisições hostis. O estudo procura ilustrar o tema, através de uma história financeira tipo, analisando uma empresária portuguesa do século XVI, Dona Grácia Nasi. A vida de Dona Grácia serve como pretexto para a introdução de diversas ferramentas analíticas, complementares às existentes no mundo das finanças e dos negócios. Essas ferramentas são: Teoria Q, análise literária hermenêutica e as perspetivas sociológicas. A tese procura, então, preencher uma parte da lacuna na literatura académica de finanças e negócios, apresentando uma ferramenta analítica qualitativa.; This study addresses the similarities between two types of hostilities (business wars called competition) and physical altercations between nations called wars. We have based this study on the theoretical work of Ephraim Kam. Kam hypothesizes that in the political world there is always the potential for the surprise bellicose attack and that these attacks are not predictable. This study argues that, unlike in the political world, many attacks are predictable in business world. The study argues that the reason for past poor predictive success is that the stochastic model has been used only from the quantitative side. That is to say, scholars and practitioners have analyzed businesses from a mathematical and quantitative perspective rather than a holistic perspective. The current study fills in this gap by adding a theoretical qualitative systematized methodology that permits a more extensive business evaluation and its proclivity to be subjected to a hostile takeover. The study accomplishes this goal by means of theoretical design of one moment in financial history, the study of Portugal's leading 16th century businesswoman, Doña Gracia Nasi. Doña Gracia's life sets the stage for introducing several new analytical tools to the world of finance and business. These are: Q theory, hermeneutic literary analysis, and sociological perspectives. By means of new academic tools, the thesis seeks to fill in some of the lacunae within finance and business academic literature. Descrição: Tese de Doutoramento em Gestão

2014-12-11T00:00:00Z Cruz, Sofia Gaspar http://hdl.handle.net/10348/3392 2014-11-21T02:00:57Z 2014-11-20T00:00:00Z

Título: Gestão do conhecimento em instituições de saúde com diferentes modelos de gestão Autor: Cruz, Sofia Gaspar Resumo: A gestão do conhecimento tem, desde há duas décadas, suscitado acrescido interesse entre investigadores e gestores. O interesse manifestado por este constructo baseia-se no pressuposto da existência de relação entre a gestão do conhecimento e o desempenho organizacional, numa lógica de criação e manutenção de vantagens competitivas sustentáveis, aspetos cruciais no atual contexto de elevada incerteza e constante mudança. Muito embora a gestão do conhecimento tenha surgido associada a setores altamente competitivos, atualmente, apresenta-se como uma necessidade operacional transversal a qualquer organização. No caso concreto das organizações de saúde, o interesse por esta temática, advém, por um lado, da pressão para aumentar a produtividade e diminuir os custos e, por outro, da procura incessante de melhoria da qualidade dos cuidados e diminuição dos erros clínicos, num momento em que se generalizam medidas reformistas, em prol da eficiência e sustentabilidade do sistema de saúde. Mercê da importância do conhecimento, e em decorrência da sua gestão, assiste-se a uma profusão de literatura em torno destes constructos. Porém, a compreensão de alguns fatores críticos de sucesso da gestão do conhecimento ainda não encontrou uma clarificação e sistematização inequívocas. O trabalho empírico centra-se na temática da gestão do conhecimento em instituições de saúde com diferentes modelos de gestão, de um modo particular, na análise da relação entre caraterísticas individuais e organizacionais e a gestão do conhecimento, e em que medida essa relação é mediada pelo modelo de gestão da instituição de saúde. Trata-se de um estudo quantitativo, descritivo-correlacional, que utilizou como instrumento de recolha de dados um questionário, que foi por nós objeto de construção, a partir de itens de instrumentos de medida disponíveis na literatura. A amostra é constituída por 671 colaboradores de dez instituições públicas de saúde (hospitais e centros de saúde) enquadradas em três modelos de gestão: modelo Setor Público Administrativo, modelo Entidade Pública Empresarial e modelo Unidade de Saúde Familiar. Os resultados indicam que a gestão do conhecimento ocorre nas instituições públicas de saúde portuguesas, ainda que sob a forma de iniciativas isoladas e não propriamente como um projeto estruturado. O modelo de gestão da instituição mostra ser determinante da ocorrência de gestão do conhecimento: além de diferentes graus de ocorrência de gestão do conhecimento, nos vários modelos de gestão, verificam-se diferentes variáveis explicativas da gestão do conhecimento, nos modelos Setor Público Administrativo e Entidade Pública Empresarial. A gestão do conhecimento ocorre em maior grau nas instituições de saúde pautadas pelos princípios da gestão empresarial, concretamente, e de um modo sucedâneo, nas Unidades de Saúde Familiar e hospitais Entidades Públicas Empresariais. Vários fatores, mormente, de caráter organizacional, mas também de índole individual, mostram influenciar a ocorrência de gestão do conhecimento nas instituições públicas de saúde. Apesar de, alguns desses fatores serem transversais aos vários modelos de gestão, os fatores que determinam a ocorrência de gestão do conhecimento, em cada modelo de gestão, são distintos, sendo essa distinção evidente, por exemplo, na sua relevância preditiva. De entre os vários fatores organizacionais sobressaem a cultura organizacional, que emerge como a variável com maior poder explanatório no modelo Entidade Pública Empresarial e no modelo Setor Público Administrativo, e a utilização das tecnologias de informação e comunicação, que integra os modelos explicativos da gestão do conhecimento, no modelo Entidade Pública Empresarial e no modelo Setor Público Administrativo e está estatisticamente correlacionada com a gestão do conhecimento nas Unidades de Saúde Familiar. De salientar o papel preditivo de algumas variáveis individuais na gestão do conhecimento, mormente no modelo Entidade Pública Empresarial. Este trabalho contribui para o enriquecimento de uma linha de investigação que se refere à relação entre variáveis organizacionais e, principalmente, individuais e a gestão do conhecimento, num setor onde os estudos no âmbito desta temática são ainda incipientes, sobretudo num quadro de diferentes modelos de gestão. Contribui também para a prática de gestão das unidades de saúde e para as políticas de saúde através de sugestões/orientações que poderão vir a suportar medidas no âmbito da gestão estratégica, num contexto de diferentes modelos de gestão.; For two decades, the management of knowledge has raised an increased interest among researchers and managers. The interest expressed by this issue is based on the assumption that there is a connexion between knowledge management and organizational performance, establishing an idea of creation and preservation of sustainable competitive advantages, which are crucial aspects in the current context of high uncertainty and constant change. Soever the knowledge management has emerged associated with highly competitive departments, nowadays, it introduces itself to any organization as a transversal operational requirement. In what concerns to health organizations, at a time reformist measures are generalized to produce an efficient and sustainable health system, the interest in this topic comes, on the one hand, from the pressure to increase productivity and to reduce costs, and on the other hand, from the unceasing demand for the improvement of care quality as well as to diminish clinical errors. Due to the significance of knowledge and as an outcome of its management, we are assisting a plenty of literature around these ideas. However, the comprehension of some critical success factors of the knowledge management has, yet, not found an unequivocally clarification and systematization. The empirical work focuses on the subject of knowledge management on health institutions with different management standards, particularly, in the analysis of the relation between individual and organizational features and the knowledge management, and to what extent that relation is mediated by the health's institution knowledge management. This is a quantitative, descriptive, correlative study, which used a survey as an instrument of data collection. This construction's object was built by us from items measuring instruments available in the literature. The sample consists of 671 employees of ten health public institutions (hospitals and health centers) classified in three management models: the Public Administrative Sector model, the Public Corporate Entity model and the Family Health Unit model. The results indicate that knowledge management occurs in the portuguese public health institutions, though in the form of isolated initiatives instead of a structured project. The institution's management model shows to be crucial on the occurrence of knowledge management: besides the occurrence of different degrees of knowledge management in various management models, there are different explanatory variables for knowledge management in both Public Administrative Sector and Public Corporate Entity models. The knowledge management happens in a higher degree in health institutions ruled by the principles of corporate management, particularly, Family Health Units followed by hospitals which are Public Corporate Entities. There are several factors, especially of organizational character, but also of individual character, which show influence on the occurrence of knowledge management at public health institutions. Although some of these factors are transversal to the several management models, there are distinct factors that determine the occurrence of knowledge management in each management model, for example, in its predictive relevance. Among several organizational factors stands out an organizational culture, which emerges as a variable with higher explanatory power on the Public Corporate Entity model as well as on the Public Administrative Sector model, and the use the technologies of information and communication, which incorporates the explanatory models of the knowledge management, in the Public Corporate Entity and in the Public Administrative Sector, and which is statistically correlated with knowledge management in the Family Health Units. The predictive role of some individual variables in knowledge management must be emphasized, especially in Public Corporate Entity model. This work contributes to the enrichment of a line on research, which refers, mainly, to the relation, between organizational and individual variables and the knowledge management, particularly in an area where the research is still incipient, especially, in a context of different management models. In this context, this work also contributes to the practice of management on Health Units and it contributes to the health policies through suggestions that may support measures in strategic management. Descrição: Tese de Doutoramento em Gestão

2014-11-20T00:00:00Z Monteiro, Maria Auxiliadora http://hdl.handle.net/10348/3389 2014-11-20T02:00:52Z 2014-11-19T00:00:00Z

Título: Níveis de flexibilidade, hidroxiprolina e força muscular abdominal em bailarinas submetidas à técnica de dança moderna de Martha Graham Autor: Monteiro, Maria Auxiliadora Resumo: O objetivo do presente estudo foi analisar os níveis de flexibilidade, hidroxiprolina urinária e força muscular abdominal em bailarinas submetidas à técnica de dança moderna de Martha Graham. A pesquisa se caracterizou por um delineamento quase-experimental, onde foi utilizado como amostra 50 bailarinas, com idade média de 18 ± 5,29 anos, de um grupo de dança do Colégio Gentil Bittencourt, localizado no Bairro Nazaré, em Belém, Pará. A amostra foi submetida ao programa de dança moderna de Martha Graham durante 12 semanas. Para a avaliação das variáveis foram utilizados: a goniometria (na avaliação da flexibilidade) nos movimentos espacate anteroanterior/ flexão, espacate antero-anterior/extensão, espacate latero-lateral, extensão, elevação frontal e elevação lateral da articulação do quadril, o marcador bioquímico Hidroxiprolina (HP) (mensurado pela concentração na urina) e o teste de repetição máxima de 1 minuto (na avaliação da força muscular abdominal). Foi realizada a análise estatística descritiva com o objetivo de estimar as medidas de tendência central (média e mediana) e variação (desvio-padrão e erro-padrão) além da distribuição de freqüências, absolutas e relativas. E a análise estatística inferencial por meio do teste de Shapiro Wilk para a análise da normalidade da amostra; o teste de Wilcoxon (não-paramétrico) e o teste t de Student (paramétrico) para comparação entre as médias dos dois diferentes momentos de testagem (antes e depois do treinamento). Nos resultados pôde-se observar aumentos significativos, no pósteste, nas variáveis: flexibilidade (para todos os movimentos - espacate anteroanterior/ flexão (Δ=4,43 graus; p=0,039), espacate antero-anterior/extensão (Δ=5,02 graus; p=0,004), espacate latero-lateral (Δ=12,91 graus; p=0,014), extensão (Δ=8,40 graus; p=0,000), elevação frontal (Δ=15,57 graus; p=0,000) e elevação lateral (Δ=10,11 graus; p=0,000)), nos níveis de hidroxiprolina urinária (Δ=6,05mg/24h; p=0,000) e nos níveis de força abdominal (Δ = 2,70 repetições; p=0,000). Desta forma, pôde-se concluir que a intervenção da dança moderna pode gerar aumentos na amplitude de movimento articular, nos níveis de hidroxiprolina urinária e na força muscular abdominal em sujeitos jovens, nos resultados também pode-se verificar os planos de aula e acompanhar como foi aplicada esta técnica durante os três meses de estudo.; The purpose of this study was to analyze the levels of flexibility, muscular abdominal strength and hydroxyproline urinary undergoing dancers of technique the Martha Graham modern dance. The research was characterized by a quasiexperimental design, which was used as a sample 50 dancers, mean age 18 ± 5.29 years, a dance group of the College Gentil Bittencourt, located in District Nazareth, in Belém, Pará The sample was submitted to the program of Martha Graham modern dance for 12 weeks. For the evaluation of variables were used: goniometry (the evaluation of flexibility) movements antero-anterior/flexão splits, splits antero-anterior/extensão, splits latero-lateral extension, front elevation and side elevation of the hip joint, the biochemical marker Hydroxyproline (HP) (measured by the concentration in urine) and test repetition maximum of 1 minute (in the evaluation of abdominal muscle strength). We performed descriptive statistical analysis in order to estimate the measures of central tendency (mean and median) and variation (standard deviation and standard error) than the distribution of frequencies, absolute and relative. And the inferential statistical analysis by the Shapiro Wilk normality for the analysis of the sample, the Wilcoxon test (nonparametric) and Student's t test (parametric) to compare the mean of two different testing times (before and after training). The results could be observed significant increases in the post-test, the variables: flexibility (for all moves - splits antero-anterior/flexão (Δ = 4.43 degrees, p = 0.039), splits antero-anterior/extensão ( Δ = 5.02 degrees, p = 0.004), lateral-lateral splits (Δ = 12.91 degrees, p = 0.014), extension (Δ = 8.40 degrees, p = 0.000), front elevation (Δ = 15, 57 degrees, p = 0.000) and side elevation (Δ = 10.11 degrees, p = 0.000)) in levels of urinary hydroxyproline (mg/24 h Δ = 6.05, p = 0.000) and levels of abdominal strength (( repetitions Δ = 2.70, p = 0.000). Thus, we concluded that the intervention of modern dance can generate increases in joint range of motion, the levels of urinary hydroxyproline and abdominal muscle strength in young subjects, the results can also be checked lesson plans and track how this technique was applied during the three month study. Descrição: Tese de Doutoramento em Ciências do Desporto

2014-11-19T00:00:00Z