Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10348/10969
Title: Citogenética convencional e FISH - Apoio no diagnóstico pós-natal
Authors: Pereira, Ana Catarina Alves
Advisor: Leite, Maria do Rosário Lima Viseu de Carvalho Pinto
Gaivão, Isabel O Neill de Mascarenhas
Keywords: Citogenética
alterações cromossómicas
Issue Date: 10-Feb-2021
Abstract: A citogenética dedica-se ao estudo da descrição da estrutura e do número dos cromossomas, possibilitando a identificação de alterações cromossómicas associadas a vários fenótipos com alterações. A análise citogenética pode ser utilizada em contexto de diagnóstico pós-natal, sendo o sangue periférico e os fibroblastos, os tipos de tecidos utilizados com mais frequência. No diagnóstico pós-natal existem várias indicações clínicas para estudo citogenético. As alterações cromossómicas são a principal causa de défice cognitivo, de desenvolvimento anomalias congénitas no Homem. Os casais com história de abortos espontâneos de repetição possuem uma probabilidade de serem portadores de alterações cromossómicas. Outra indicação frequente para estudo citogenético é a infertilidade, sendo o síndrome de Klinefelter e o síndrome de Turner as causas mais comuns da infertilidade masculina e feminina respetivamente. Em cerca de 50% dos abortos espontâneos é identificada uma alteração cromossómica, nomeadamente aneuploidia ou poliploidia, devido a erro mitóticos, meióticos ou pós-zigótico, rearranjos desequilibrados de novo e produtos da segregação desequilibrada das translocações equilibradas dos pais. A realização deste trabalho teve como principais objetivos a aprendizagem da prática laboratorial das técnicas de citogenética convencional e citogenética molecular e na aquisição de experiência na área de diagnóstico pós-natal. Durante o estágio de mestrado realizado no Laboratório de Genética do Centro Hospitalar de Trás-os-Montes e Alto Douro foram realizadas culturas de sangue periférico, uma sem sincronizadores e 41 culturas sincronizadas, e 23 culturas de produtos de abortamento. Todo o procedimento até à obtenção de metáfases foi executado, com particular atenção ao espalhamento com o objetivo de se obter metáfases com uma boa dispersão dos cromossomas. Em todas as amostras aplicou-se a técnica de bandeamento GTL, com o objetivo de classificar e organizar os cromossomas segundas as recomendações do Sistema Internacional de Nomenclatura Citogenética Humana (ISCN, 2016), e complementadas por bandeamento CBL e NOR para esclarecimento de dúvidas na análise. Foi também realizada em 3 amostras a técnica de FISH com sondas de sequência única para o cromossoma 7 e para o cromossoma 22, para confirmar a análise por citogenética clássica. Nas culturas das amostras de sangue periférico obtiveram-se metáfases que permitiram a sua análise. Nos produtos de abortamento obteve-se crescimento celular em 18 casos. Em relação à análise citogenética, 4 nas amostras de sangues apresentavam alterações cromossómicas, nomeadamente um com o síndrome de Klinefelter, um caso com uma translocação envolvendo os cromossomas 8 e 17, um com um derivativo dos cromossomas 14 e 21 e um caso com uma inversão do cromossoma 11. Nos produtos de abortamento, foram observados 7 casos com aneuploidias (45,X, 47,XX,+22, 47,XX,+16, 47,XY,+15, 47,XY,+22 e dois casos com tetraploidias). As técnicas citogenéticas e o FISH utilizados neste trabalho foram um meio de diagnóstico importante para os casos em estudo pois permitiram, em alguns casos, a identificação de alterações cromossómicas. Com este estágio, foi adquirida experiência numa área laboratorial importante no apoio ao diagnóstico.
Cytogenetics is dedicated to the study of describing the structure and number of chromosomes, enabling the identification of chromosomal changes associated with various phenotypes with changes. Cytogenetic analysis can be used in the context of postnatal diagnosis, peripheral blood and fibroblasts being the most frequently used tissue types. In the postnatal diagnosis there are several clinical indications for cytogenetic study. Chromosomal changes are the main cause of cognitive impairment, and of development and congenital anomalies in man. Couples with a history of recurrent spontaneous abortions arelikely to have chromosomal changes. Another frequent indication for cytogenetic study is infertility, with Klinefelter and Turner syndromes being the most common causes of male and female infertility, respectively. In about 50% of spontaneous abortions, a chromosomal alteration is identified, namely aneuploidy or polyploidy, due to mitotic, meiotic, or post-zygotic errors, unbalanced rearrangements again and products of the unbalanced segregation of the parents balanced translocations. The accomplishment of this work had as main objectives the learning of the laboratory practice of the techniques of classic cytogenetics and molecular cytogenetics and the acquisition of experience in the area of postnatal diagnosis. During the master's internship held at the “Laboratório de Genética do Centro Hospitalar de Trás-os-Montes e Alto Douro”, peripheral blood cultures, one without synchronizers and 41 synchronized cultures, and 23 cultures of abortion products were performed. The entire procedure up to the achievement of metaphases was performed, with particular attention to scattering in order to obtain metaphases with a good dispersion of chromosomes. In all samples the GTL technique was applied in order to classify and organize the chromosomes according to International System for Human Cytogenetic Nomenclature (ISCN, 2016) recommendations, and complemented by CBL and NOR banding to clarify doubts in the analysis. The FISH technique was also performed on 3 samples with several single sequence probes for chromosome 7 and chromosome 22, to confirm the analysis by classical cytogenetics. In the cultures of the peripheral blood samples, metaphases were obtained that allowed their analysis. In abortion products, cell growth was obtained in 18 cases. Regarding cytogenetic analysis, 4 in the blood samples showed chromosomal alterations, namely one with Klinefelter syndrome, one case with a translocation involving chromosomes 8 and 17, one with a derivative of chromosomes 14 and 21, one case with an inversion of chromosome 11. In abortion products, 7 cases with aneuploidies were observed (45,X, 47,XX,+22, 47,XX,+16, 47,XY,+15, 47,XY,+22 and two cases with tetraploidies). The cytogenetic techniques and the FISH used in this work were an important means of diagnosis for the cases under study, as they allowed, in some cases, the identification of chromosomal alterations. With this internship, experience was gained in an important laboratory area to support the diagnosis.
Description: Declara-se sob compromisso de honra que este trabalho foi expressamente elaborado pelo autor, como Relatório de Estágio original, para o efeito da obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia para as Ciências da Saúde, na Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro
URI: http://hdl.handle.net/10348/10969
Document Type: Master Thesis
Appears in Collections:DGB - Dissertações de Mestrado
TD - Dissertações de Mestrado

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