Improvement of gene transfer mediated by Agrobacterium and transgenic plant regeneration of Portuguese table grape Dona Maria (Vitis vinifera L.) in order to overexpression of the gene encoding the stilbene synthase

Data
2016-09-11
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Resumo
Since beginning of crops domestications that grapevine has had a huge impact in agriculture. Then which its cultivation has been high and its product have gain importance in a commercial level, worldwide. The table grape is usually suitable for consumption as fresh fruit. Characteristics like size, shape and colour of berries allow its commercialization. Dona Maria is a white table typically Portuguese that has important characteristics which becomes very attractive in market. Resveratrol is a phytoalexin with high therapeutic properties, which becomes important in many levels. It is important the study of this cultivar to improve the production of resveratrol. of resveratrol. Agrobacterium tumefaciens, used as a vector in protocols of gene transfer, have a high efficiency in the transferred of genes with various genetic construction, allowing the improvement of certain characteristics. In this work was stablished protocol of genetic transferred using embryogenic calluses of Dona Maria and Pinot Noir. It was used Agrobacterium tumefaciens as a mediator of gene transfer, with 2 different plasmids (p35SGUSINT and pHKvst). Were done 4 genetic transfer processes using selective pressure initially with 150 mg/L of kanamycin after 3 weeks of coculture. It was made an alternative process using three different methods of regeneration and allowing, after that, the comparison of their efficiency. During selective pressure step, it was possible observe embryos in different phases of development. Some of them converted in plantlets.
Desde o inicio da domesticação das espécies de cultivo, que a videira tem tido um enorme impacto na agricultura. Desde então que o seu cultivo tem sido elevado e os seus produtos têm ganho bastante importância a nível comercial, por todo o mundo. A uva de mesa é usualmente utilizada para consumo como fruta fresca. Características como o tamanho, forma e cor das bagas, permitem a sua comercialização. Dona Maria é uma uva de mesa branca tipicamente Portuguesa que apresenta importantes características que a tornam atrativa no mercado. O resveratrol é uma fitoalexina com elevadas propriedades terapêuticas, que o tornam importante a vários níveis. Uma vez que pode ser encontrado em produtos de videira, é importante o estudo desta cultivar de forma a melhorar a produção de resveratrol. Agrobacterium tumefaciens tem sido usado como vetor em protocolos de transferência de genes, com uma elevada eficiência na transferência de genes com várias construções genéticas, permitindo o melhoramento de determinadas características. Neste trabalho foi estabelecido um protocolo de transferência de genes usando calos embriogénicos de Dona Maria e Pinot Noir. Foi utilizado o Agrobacterium tumefaciens como mediador da transformação, com 2 plasmídeos diferentes (p35SGUSINT e pHKvst). Foram feitos 4 ensaios de transferência de genes usando pressão seletiva 150 mg/L de canamicina, iniciada após 3 semanas da cocultura. Efetuou-se também um processo alternativo usando 3 métodos diferentes de regeneração, permitindo posteriormente a comparação da sua eficiência. Durante a etapa de pressão seletiva, foi possível observar embriões em diferentes fases de desenvolvimento. Alguns deles converteram em plântulas.
Descrição
This dissertation was specifically prepared to obtain the master degree in Technologic, Comparative and Molecular Genetics.
Palavras-chave
Grapevine , Dona Maria
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