Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10348/33
Title: Caracterização experimental do urotélio do rato
Authors: Oliveira, Paula Alexandra Martins de
Advisor: Lopes, Carlos Alberto da Silva
Colaço, Aura Antunes
Keywords: Rato
Neoplasia da bexiga
Indução química
Issue Date: 2006
Abstract: A revisão bibliográfica desta tese de doutoramento descreve os aspectos gerais da carcinogénese química e enumera os diversos modelos experimentais, com roedores, que se podem utilizar no estudo da carcinogénese química do urotélio. Na parte experimental são apresentados quatro trabalhos experimentais diferentes. No primeiro trabalho caracterizámos as lesões histopatológicas identificadas em ratos Fisher 344 após a exposição oral durante 20 semanas à N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamina e instiladas intravesicalmente com a mitomicina C e o Bacillus de Calmette-Guérin. Estudámos o conteúdo em ADN destas lesões e verificámos que os animais instilados com a mitomicina C e o Bacillus de Calmette-Guérin apresentaram menor frequência de aneuploidia de ADN. Nos carcinomas papilares de baixo e de alto grau tratados com a mitomicina C ou o Bacillus de Calmette-Guérin o índice de proliferação diminuiu e o índice de apoptose aumentou. Observámos correlações positivas entre o índice de proliferação e o índice de apoptose (r=0,438, p<0,01), entre o índice de proliferação e a lesão urotelial (r=0,425, p<0,05), e o índice de apoptose e a lesão urotelial (r=0,275, p<0,01). Uma correlação positiva foi encontrada entre a ploidia e o índice de proliferação (r=0,245, p<0,05). No segundo trabalho descrevemos as lesões observadas no urotélio normal do rato após instilações intravesicais repetidas com a mitomicina C ou o Bacillus de Calmette-Guérin, e estudámos o seu conteúdo de ADN e o seu índice de proliferação. Apenas foram identificadas lesões uroteliais nos grupos instilados com a mitomicina C. O índice de proliferação apresentou valores de 11,73%, 22,43%, 31,46% (p<0,05) nas hiperplasias simples, displasias, e carcinomas in situ, respectivamente. A frequência de aneuploidia de ADN foi de 25% nas hiperplasias simples e de 85,2% nas displasias (p=0,041). Todos os carcinomas in situ apresentaram conteúdo multiplóide de ADN e todas as metaplasias epidermóides exibiram conteúdo diplóide de ADN. No terceiro trabalho estudámos a expressividade da caderina E durante a carcinogénese química do urotélio do rato, exposto à N-butil-N-(4- hidroxibutil) nitrosamina durante 10, 15 e 20 semanas. A hiperplasia simples e a metaplasia epidermóide apresentaram um padrão de marcação idêntico ao urotélio normal, com a expressividade confinada à membrana citoplasmática das células uroteliais. A caderina E apresentou uma expressividade diminuída em 38,1% das hiperplasias nodulares, 41,4% das displasias e 100% dos papilomas. Todos os tumores papilares de baixo potencial maligno, os carcinomas papilares de baixo e alto grau, e os carcinomas invasivos revelaram um padrão de marcação anormal com marcação citoplasmática e descontinuidade na positividade membranar. A perda de expressividade do carcinoma papilar de baixo grau relativamente à hiperplasia simples, hiperplasia nodular e displasia apresentou diferenças estatisticamente significativas (p=0,0001; p=0,007 e p=0,008, respectivamente). Observou-se uma diminuição idêntica na expressividade da caderina E entre o tumor papilar de baixo potencial maligno relativamente à hiperplasia simples, hiperplasia nodular e displasia (p=0,0001; p=0,001 e p=0,0001, respectivamente). No último trabalho experimental, utilizando em conjunto a citometria de imagem e a citogenética, avaliámos o conteúdo de ADN nos carcinomas papilares uroteliais do rato induzidos pela N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamina. Para este estudo apenas foram utilizadas as neoplasias com crescimento exofítico classificadas como carcinomas papilares de baixo e de alto grau. Os estudos da ploidia de ADN foram realizados em 28 carcinomas papilares de baixo grau e 21 carcinomas papilares de alto grau, 28,6% dos carcinomas papilares de baixo grau e 100% dos carcinomas papilares de alto grau apresentaram conteúdo aneuplóide de ADN (p<0,005). Para a cultura de células foram seleccionadas amostras de um carcinoma papilar de baixo grau e de um carcinoma papilar de alto grau. As populações de células analisadas em ambas as neoplasias demonstraram existir múltiplas alterações numéricas, alterações cromossómicas e a presença vários cromossomas marcadores.
The bibliographical revision of this PhD thesis describes the general features of chemical carcinogenesis and lists the various experimental models with rodents that can be used to study chemical carcinogenesis of the urothelium. Four different experiments are described in the experimental section. In the first, we characterize histopathological lesions identified in Fisher 344 rats after oral exposure to N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine for 20 weeks and having been intravesically instilled with mytomycin C and Bacillus Calmette-Guérin. We studied the DNA content of these lesions and we proved that those animals instilled with mytomycin C and Bacillus Calmette-Guérin dsplayed fewer DNA aneuploidy. The proliferation index for low- and high-grade papillary tumours treated with mytomycin C and Bacillus Calmette-Guérin decreased and apoptotic index increased. We observed a positive correlation between the proliferation index and the apoptotic index (r=0.438, p<0.01), between the proliferation index and the urothelial lesions (r=0.425, p<0.05) and the apoptotic index and urothelial lesions (r=0.275, p<0.01). We also found a positive correlation between DNA content and the proliferation index. In the second experiment, we describe histopathological lesions observed in the normal rat urothelium after repeat intravesical instillations of mytomycin C and Bacillus Calmette-Guérin, and studied its DNA content and proliferation index. Only urothelial lesions from the groups instilled with MMC were identified. The proliferation index gave values of 11.73%, 22.43%, 31.46% (p<0.05) in the simple hyperplasias, dysplasias and carcinomas in situ, respectively. The frequency of DNA aneuploidy was 25% in simple hyperplasia and 85.2% in dysplasia (p=0.041). All the carcinomas in situ displayed multiploid DNA content and all squamous metaplasia displayed diploid DNA content. In the third experiment, we studied the expressiveness of the E-cadherin during the chemical carcinogenesis of the rat urothelium exposed to N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine for 10, 15 and 20 weeks. Simple hyperplasia and squamous metaplasia showed normal expressivity pattern, which was identical to normal urothelium, with the expressivity confined to cytoplasmatic membrane of urothelial cells. The expressiveness of E-cadherin was reduced by 38.1% in nodular hyperplasia, 41.4% in dysplasias and 100% papilomas. All the papillary tumours of low malignant potential, the high-and low-grade papillary Summary carcinomas, as well as invasive carcinoma revealed an unusual expressiveness pattern which included citoplasmatic expression and a lack of continuity in membranal positivity. A lack of expressivity in low-grade papillary carcinoma compared with simple hyperplasia, nodular hyperplasia and dysplasia demonstrated significant statistical differences (p=0.0001; p=0.007; and p=0.008, respectively). A lack of expressivity in low-grade papillary carcinoma compared with simple hyperplasia, nodular hyperplasia and dysplasia showed significant statistical differences (p=0.0001; p=0.001 and p=0.0001, respectively). In the final experiment, in which we used a combination of image analysis and cytogenetic analysis together, we analysed the DNA content of papillary carcinomas in the rat urothelium induced by N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamine. Only tumours with exophitic growth classified as low-and high-grade papillary carcinomas were used in this study. DNA ploidy studies were carried out on 28 low-grade papillary carcinomas and 21 high-grade papillary carcinoma, 28.2% of the low-grade papillary carcinoma and 100% of high-grade papillary carcinomas exhibited aneuploid DNA content (p<0.005). Samples from a lowgrade papillary carcinoma as well as from a high-grade papillary carcinoma were selected for cell culture. The cell populations in both tumours displayed multiple numerical and chromossomal alterations as well as the presence of several marker chromosomes.
Description: Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
URI: http://hdl.handle.net/10348/33
Document Type: Doctoral Thesis
Appears in Collections:OLD - Teses de Doutoramento

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
phd_pamoliveira.pdf8,04 MBAdobe PDFThumbnail
View/Open


FacebookTwitterDeliciousLinkedInDiggGoogle BookmarksMySpace
Formato BibTex mendeley Endnote Logotipo do DeGóis Logotipo do Orcid 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.