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Título: Identificação e caracterização molecular da flora vaginal bacteriana do burro de Miranda (Equus asinus)
Autor: Carvalho, Sílvia Ferreira
Orientador: Poeta, Patrícia Alexandra Curado Quintas Dinis
Igrejas, Gilberto Paulo Peixoto
Palavras-chave: Raça asinina autóctone
Região de Miranda (Portugal)
Flora bacteriana vaginal
Identificação
Resistência a antibióticos
Streptococcus zooepidemicus
Fatores de virulência
Burro de Miranda
Data: 4-Ago-2016
Resumo: O Burro de Miranda é a única raça asinina autóctone portuguesa, originária do Nordeste de Portugal, encontrando-se de momento em vias de extinção. As mudanças na microbiota bacteriana genital fazem parte dos sinais mais comuns de problemas reprodutivos. Em equinos, e sobretudo no Burro de Miranda poucos estudos foram realizados. O estudo da microbiota em animais tem atingido cada vez mais importância, visto que estas comunidades microbianas podem ser cruciais para as funções normais do organismo. O principal objectivo deste trabalho foi identificar e caracterizar bactérias provenientes de amostras vaginais de fêmeas de Burro de Miranda e estabelecer se estas podem conduzir a situações de infertilidade e abortos. De um total de 54 amostras vaginais de 27 burras de Miranda foram obtidos 149 isolados. Entre estes isolados identificaram-se 130 bactérias Gram-positivas, 14 bactérias Gram-negativas e 5 bactérias sem Gram determinado. Os géneros mais isolados foram Bacillus spp., Corynebacterium spp., Rhodococcus spp. (59 isolados), Lactobacillus spp. (32 isolados) e Staphylococcus spp. (21 isolados). Outras bactérias isoladas na flora foram identificadas como Aerococcus viridans(3 isolados), Aeromonas hydrophila(1 isolado),Enterococcus faecium(3 isolados),Escherichia coli(1 isolado),Gemella haemolysans(1 isolado), Micrococcus spp.(2isolados), Mycoplasmaspp.(5isolados), Neisseria spp.(3 isolados),Oligella urethralis(1 isolado),Pantoea Agglomerans(2isolados), Pseudomonas chlororaphis(6 isolados),Streptococcus acidominimus(1 isolado), Streptococcus oralis(2isolados), Streptococcus spp. (3isolados)e Streptococcus zooepidemicus(3isolados). A flora bacteriana vaginal de burras que se apresentavam com problemas reprodutivos e sem problemas reprodutivos não diferiu entre si. Testou-se a susceptibilidade a antibióticos pelo método da difusão em disco de acordo com as normas do CLSI nos isolados Streptococcus oralise Streptococcus zooepidemicus, usando-se 9 antibióticos: ampicilina [10 µg], cefepima [30 µg], clindamicina [2 µg], cloranfenicol [30 µg], eritromicina [15 µg], linezolida [30 µg], quinupristina-dalfopristina [15 µg], tetraciclina [30 µg] e vancomicina [30 µg].Os isolados de Streptococcus oralis apresentaram-se susceptíveis a todos os antibióticos testados. Os isolados de Streptococcus zooepidemicus mostraram-se resistentes ou intermédios à tetraciclina e susceptíveis ao resto dos antibióticos testados. Estudou-se, também, a presença de 5 genes codificadores de factores de virulência (szeF,szeN,szeP,szm e szp) nos isolados de Streptococcus zooepidemicus através da técnica de PCR com recurso a primers específicos. Os genes codificadores de factores de virulência mais detectados foram os genes szeP e szp, tendo sido detectados nos 3 isolados estudados. Os dois isolados de Streptococcus zooepidemicusprovenientes de burras com problemas reprodutivos apresentaram os 3 genes codificadores de sAgs estudados neste trabalho (szeF,szeN,szeP), enquanto que no isolado da burra sem problemas reprodutivos apenas se detectou o gene szeF. Este estudo deu a conhecer a flora bacteriana vaginal do Burro de Miranda e visto existirem poucos estudos realizados neste assunto e, especificamente nesta raça autóctone, os resultados obtidos neste trabalho poderão ser vantajosos para futuros trabalhos que se realizem nesta área.
The Miranda Donkey is the only Portuguese autochthonous donkey breed, native of northeastern of Portugal and it’s currently in danger of extinction. Changes in genital bacterial flora are one of the common signs of reproductive problems. In equines, especially in Miranda Donkey, few studies were carried out on this subject. The study of the microbiota in animals has gained an increasing importance, since these communities may be crucial for the normal functions of the organism. The main aim of this study was to identify and characterize bacteria from vaginal samples of jennies of Miranda Donkey and establish if these bacteria can lead to infertility and abortions. From a total of 54 vaginal samples from 27 Miranda jennies we obtained 149 isolates. Among these isolates we identified 130 Gram-positive bacteria, 14 Gram-negative bacteria and 5 bacteria without Gram determined. The most isolated genera were Bacillus spp., Corynebacterium spp., Rhodococcus spp. (59 isolates), Lactobacillus spp. (32 isolates) and Staphylococcus spp. (21 isolates).Other isolated bacterial flora were identified as Aerococcus viridans (3 isolates), Aeromonas hydrophila (1 isolate),Enterococcus faecium (3 isolates),Escherichia coli (1 isolates),Gemella haemolysans (1 isolates), Micrococcus spp. (2 isolates), Mycoplasma spp. (5 isolates), Neisseria spp.(3 isolates),Oligella urethralis (1 isolates),Pantoea Agglomerans (2 isolates), Pseudomonas chlororaphis (6 isolates),Streptococcus acidominimus (1 isolate), Streptococcus oralis (2 isolates), Streptococcus spp. (3 isolates) and Streptococcus zooepidemicus (3 isolates). We verified that the vaginal flora of the jennies with reproductive problems and without reproductive problems did not show great differences. The susceptibility to antibiotics was tested by the disk diffusion method according to the CLSI standards in the isolates of Streptococcus oralisand Streptococcus zooepidemicus, using 9 antibiotics: ampicillin [10 µg],cefepime [30 µg],clindamycin[2 µg], chloramphenicol[30 µg],erythromycin[15 µg],linezolid[30 µg], quinupristin-dalfopristin[15 µg],tetracycline [30 µg] and vancomycin [30 µg].The Streptococcus oralisisolates were susceptible to all antibiotics tested. The Streptococcus zooepidemicus isolates were resistant or intermediate to tetracycline and susceptible to the rest of the tested antibiotics. We also studied the presence of 5 genes encoding virulence factors (szeF,szeN,szeP, szm and szp)in Streptococcus zooepidemicus isolates using PCR with specific primers. The most detected genes were szeF and szp, being detected in the 3 isolates studied. The two Streptococcus zooepidemicus isolates coming from jennies with reproductive problems presented the 3 genes encoding sAgs studied in this work (szeF,szeN,szeP), while in the isolate coming from a jenny without reproductive problems only presented the gene szeF. This study reported the vaginal bacterial flora of Miranda Donkey and since there are few studies on this matter, especially in this autochthonous donkey breed, the results of this study may be an asset for future studies that take place on this area.
Descrição: Dissertação de Mestrado em Genética Molecular Comparativa e Tecnológica
URI: http://hdl.handle.net/10348/6342
Tipo de Documento: Dissertação de Mestrado
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