Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10348/716
Title: MLST e estudo genético da resistência a antibióticos e factores de virulência em Enterococcus spp. isolados de amostras fecais de douradas (Sparus aurata)
Authors: Barros, Joana Alberta Ribeiro
Advisor: Poeta, Patrícia Alexandra Curado Quintas Dinis
Igrejas, Gilberto Paulo Peixoto
Keywords: Enterococcus
Antibióticos (Glicopéptidos)
Vancomicina (VRE)
“Multilocus Sequence Typing”
Genótipo vanA
Genes de virulência
Glycopeptides
Vancomycin-resistant enterococci (VRE)
Multilocus Sequence Typing
VanA-containing enterococci
Virulence factors
Issue Date: 2010
Abstract: O reconhecimento da resistência antimicrobiana, como um fenómeno emergente em saúde pública, tem constituído um problema a nível mundial. A comunidade científica constatou a necessidade de realizar a avaliação da susceptibilidade aos antibióticos em “bactérias indicadoras” de diversas origens, como medida para combater o aumento da resistência antimicrobiana. Enterococcus spp. são bactérias comensais que colonizam a microbiota intestinal da maioria dos animais e humanos permitindo realizar estudos de emergência, ocorrência e disseminação da resistência aos antibióticos. Este trabalho teve como objectivo a avaliar a resistência antimicrobiana, identificar e avaliar o tipo de Tn1546, comparar os mecanismos e complexos clonais detectados com as estirpes mais prevalentes a nível clínico, bem como detectar a presença de genes de virulência em enterococos isolados de amostras fecais de douradas (Sparus aurata). Um total de 118 amostras fecais de douradas foram semeadas em placas de Slanetz-Bartley (suplementado e não suplementado com vancomicina). Testou-se a susceptibilidade aos antibióticos pelo método da difusão de disco de acordo com as normas do CLSI, usando-se 11 antibióticos: vancomicina, teicoplanina, ampicilina, cloranfenicol, tetraciclina, eritromicina, quinupristina-dalfopristina, ciprofloxacina e aminoglicósidos de elevada carga (estreptomicina, gentamicina, canamicina). Os genes que codificam resistência antimicrobiana e virulência foram estudados pela reacção em cadeia pela polimerase. As espécies Enterococcus faecium e Enterococcus faecalis resistentes à vancomicina foram caracterizados por técnica “Multilocus Sequence Typing”. VRE, com um mecanismo de resistência adquirida (genótipo vanA) foram detectados em 5.6% dos isolados analisados (E. faecalis, E. faecium e E. durans). A maioria dos isolados com genótipo vanA apresentou resistência à eritromicina e todos demonstraram a presença do gene erm(B). Os genes tet(L) e/ou tet(M), aph(3!)- IIIa, aac(6!)-aph(2") e ant(6)-Ia foram identificados nos isolados vanA resistentes aos antibióticos tetraciclina, canamicina, gentamicina e estreptomicina, respectivamente. Todos os isolados vanA apresentaram a estrutura tipo do Tn1546, sem inserções nem deleções, excepto um isolado que apresentou a inserção ISEf1 no espaço intergénico vanX-vanY. As sequências tipos ST273, ST313 e ST76 foram detectados em três E. faecium vanA e ST6 foi identificado nos dois isolados E. faecalis vanA. Nenhum dos VRE isolados apresentou genes de virulência. O estudo da resistência antimicrobiana dos 73 enterococos (6 E. faecalis e 67 E. faecium), isolados a partir de meios não suplementados com antibiótico, permitiu detectar elevadas percentagens de resistência à eritromicina, tetraciclina e quinupristinadalfopristina (58.90%, 17.81% e 13.70%, respectivamente). Os genes erm(B), tet(L) e/ou tet(M), aph(3!)- IIIa e aac(6!)-aph(2") foram demonstrados nos isolados resistentes à eritromicina, tetraciclina, canamicina e estreptomicina, respectivamente. As douradas, embora sendo consideradas peixes de águas limpas, podem constituir um reservatório de enterococos com genótipos de multiresistência aos antibióticos revelando um problema de saúde pública. Os dados obtidos neste estudo são importantes para estabelecer políticas de uso prudente de antibióticos em animais e humanos, bem com, advertir a população humana para os riscos do uso inadequado destes agentes.
The bacteria antimicrobial resistance is nowadays a public health emerging dilemma. The scientific community recognize the necessity of accomplish the evaluation of this situation with "indicative bacteria" of several origins as a measure to combat the increase of the problem. Enterococcus spp. are commensal bacteria of the intestinal tract of the majority of animals and humans that allow to monitories studies in the occurrence and spread of antibiotic resistance. The objective of this work to evaluate the antimicrobial resistance, to detect presence of genes that encode antimicrobial resistance, to evaluate the type of Tn1546, compare the mechanisms and the clonal complexes detected with the most prevalent clinical strains, as well as to detect the presence of virulence genes in Enterococcus spp. isolates of faecal samples of gilthead seabream (Sparus aurata). Antimicrobial susceptibility was performed by disk diffusion agar method as recommended by the CLSI recommendations additionally for 11 antibiotics in enterococcal isolates (ampicillin, vancomycin, teicoplanin, chloramphenicol, tetracycline, erythromycin, quinupristin-dalfopristin, ciprofloxacin and high-level resistance for streptomycin, gentamicin, and kanamycin). Genes encoding antimicrobial resistance, molecular structure of the Tn1546 and virulence were studied by polymerase chain reaction. Isolates of Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis resistant to vancomycin were characterized by Multilocus Sequence Typing. VRE with an acquired mechanism of resitance (vanA genotype) were detected in 5.6% of the analyses samples (E. faecalis, E. faecium, E. durans). Most of the vanAcontaining isolates showed resistance to erythromycin and all showed the presence of erm(B) gene. The tet(L) and/or tet(M), aph(3!)-IIIa, aac(6!)-aph(2ˮ) and ant(6)-Ia genes were identified in the vanA-containing isolates resistant to tetracycline, kanamycin, gentamicina and streptomycin, respectively. All the vanA-containing isolates presented the structure type of Tn1546, without insertion or deletion except for the isolate C2519 which presented the ISEf1 insertion in the intergenic space vanX-vanY. The sequence types ST273, ST313 and ST76 were detected in three vanA-containing E. faecium and ST6 were identified in the two vanA-containing E. faecalis isolates. None of the VRE isolates shower virulence genes. Study of antimicrobial resistance from 73 enterococci (6 E. faecalis e 67 E. faecium), isolates obtained from plates of Slanetz-Bartley not supplemented with vancomycin, allowed to detect high percentages of resistance to erythromycin, tetracycline and quinupristin-dalfopristin (58.90%, 17.81% and 13.70%, respectively). erm(B) tet(L) and/or tet(M), aph(3!)- IIIa e aac(6!)-aph(2") genes were showed in isolates resistant to erythromycin, tetracycline, kanamycin and gentamicin, respectively. The gilthead seabream, while being as clean water, can be a reservoir of enterococci with genotypes of multidrug resistance to antibiotics reveals a public health problem. The information obtained in this study are important for establishing policies for prudent use of antibiotics in both animals and humans with good, to warn the human population to the risks of inappropriate use of these agents.
Description: Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde
URI: http://hdl.handle.net/10348/716
Document Type: Master Thesis
Appears in Collections:OLD - Dissertações de Mestrado

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