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Title: Caracterização morfológica e molecular de estirpes fúngicas e bacterianas isoladas de morcegos que habitam abrigos subterrâneos na região de Trás-os-Montes
Authors: Sousa, Márcia Daniela Rocha de
Advisor: Cardoso, Maria Das Neves Mitelo Morão De ...
Marques, Guilhermina Miguel Da Silva
Keywords: Pseudogymnoascus destructans
microbiota
Issue Date: 24-May-2019
Abstract: Os morcegos são reservatórios de diversas doenças, sendo portadores e disseminadores de diversas estirpes fúngicas e bacterianas com importância na saúde pública e animal. A Síndrome do Nariz Branco (WNS), foi detetada em 2006, em Nova Iorque e desde a sua deteção até ao ano de 2018, está presente em 33 estados dos EUA e em 7 províncias do Canadá, sendo que os dados apontam para a morte de cerca de 6 milhões de morcegos em várias regiões do continente americano. Em 2009, verificou-se que Pseudogymnoascus (Geomyces) destructans (Pd) era o agente causal desta infeção cutânea em morcegos. A presença de Pd, foi reportada no continente europeu em 2008 e confirmada com ferramentas moleculares em 2009, no entanto, a morte em massa não se verifica. Em Portugal, P. destructans foi isolado pela primeira vez em 2014 na região de Trásos-Montes, o que mostra a importância dos objetivos deste trabalho no contexto da avaliação integrada da relevância ecológica dos morcegos. Os resultados obtidos confirmam a ocorrência de uma microbiota diversa e complexa nos quirópteros que são espécies-chave, isto é, desempenham um importante papel nos ecossistemas onde se encontram. O isolamento de P.destructans em meios de cultura apropriados, revelou ser o método mais promissor, dada a morfologia característica das suas estruturas reprodutoras (conídeos assimetricamente curvos). Ao longo deste trabalho foram obtidos 226 isolados fúngicos e bacterianos, das amostras recolhidas em morcegos, tendo sido identificados com ferramentas moleculares 44 estirpes. A identificação morfológica e molecular dos isolados revelou a presença de fungos filamentosos na superfície cutânea, nomeadamente Pseudogymnoascus destructans (3,5%), Pseudogymnoascus pannorum (3,5%), Penicillium spp. (15,9%), entre outros. Foram também identificadas, com recurso a ferramentas moleculares, uma levedura (Holtermaniella wattica) e diversas espécies de bactérias, sendo o género com maior prevalência Pseudomonas spp. (4,9%). Curiosamente, nos testes de antagonismo realizados, este género mostrou ter elevadas percentagens de inibição de P. destructans (84,8% e 100%), com um nível de antagonismo considerado completo. Os isolados de P. destructans, no presente estudo, têm maioritariamente 99% de similaridade com as sequências anteriormente isoladas em Portugal, com a “Type strain” da Europa e com a da América do Norte. Porém, pela análise filogenética, as estirpes de P. destructans isoladas neste estudo apresentam diferenças entre si e, com as sequências das estirpes europeias e norte americanas, residindo essa diferença numa adenina, uma citocina, ou ambas, por uma timina.
Bats are reservoirs of several diseases, being carriers and disseminators of diverse fungal and bacterial strains with importance in public and animal health. The White Nose Syndrome (WNS) was detected in 2006 in New York and since its detection, until the year 2018, is present in 33 states in the USA and in 7 provinces of Canada. The data indicate the death of about 6 million bats in various regions of the American continent. In 2009, it was verified that Pseudogymnoascus (Geomyces) destructans (Pd) is the causal agent of this cutaneous infection in bats. The presence of Pd was reported on the European continent in 2008 and confirmed with molecular tools in 2009, however, mass death has not been verified. In Portugal P. destructans was isolated for the first time in 2014 in the region of Trásos-Montes, which shows the importance of this work’s objectives in the context of the integrated assessment of the ecological relevance of bats. The results confirm the occurrence of a diverse and complex microbiota in the chiroptera, which are key species, that is, they play an important role in the ecosystems where they are exist. Isolation of P. destructans in appropriate culture media has proved to be the most promising method, given the characteristic morphology of their reproductive structures (asymmetrically curved conidia). Throughout this work, 226 fungal and bacterial isolates were obtained, directly from the samples collected in bats, and 44 strains were identified with molecular tools. The morphological and molecular identification of the isolates revealed the presence of filamentous fungi on the cutaneous surface, namely Pseudogymnoascus destructans (3.5%), Pseudogymnoascus pannorum (3.5%) and Penicillium spp. (15.9%), among others. It was also identified, with molecular tools, one yeast (Holtermaniella wattica) and bacterial species, being Pseudomonasspp. (4.9%), the genus with the highest prevalence. Curiously, in the antagonistic tests performed, this genus showed high percentages of inhibition against P. destructans (84.8% and 100%), with a complete level of antagonism. The isolation rate of P. destructans was high, compared to the results described in other previous studies. Pseudogymnoascus destructans isolates in the present study have mostly 99% similarity to sequences previously isolated in Portugal, with the European Type strain and the North American. However, by phylogenetic analysis, the strains of P. destructans isolated in this study show differences between themselves and with the sequences of the European and North American strains, this difference remaining in the exchange of an adenine, a cytokine, or both, instead of a thymine.
Description: Dissertação de Mestrado em Biotecnologia para as Ciências da Saúde
URI: http://hdl.handle.net/10348/9393
Document Type: Master Thesis
Appears in Collections:DGB - Dissertações de Mestrado
TD - Dissertações de Mestrado

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